Come funziona la microscopia confocale?
La microscopia confocale a riflettanza (RCM) è una tecnica di imaging ottico che utilizza un diodo laser per illuminare un singolo punto nel tessuto. La luce proveniente dalla sezione stimolata viene riflessa e passa attraverso un filtro. Ciò consente la messa a fuoco selettiva di un punto particolare e respinge la riflessione delle zone fuori fuoco. Si ottiene così un'immagine "confocale". Il contrasto è il risultato delle differenze nell'indice di rifrazione degli organelli e delle microstrutture cellulari, risultanti in strutture bianche su sfondo nero. La microscopia confocale ci permette di analizzare le sezioni ottenute a livello bi o tridimensionale. Inoltre ci consente di controllare la profondità di campo, dando la possibilità di eliminare gli artefatti fuori fuoco. Si tratta ad oggi dell'unica tecnica che consente la visualizzazione orizzontale della pelle fino al derma superficiale (circa 300 micron di profondità).
La microscopia confocale ha diversi campi di applicazione, ma affrontiamo in questa sessione solo ciò che riguarda il basalioma.
L’obiettivo dell’esame con il microscopio confocale è confermare la presenza di un basalioma senza sottoporre il paziente a una biopsia.
La presenza di un basalioma si associa a cambiamenti tipici del sistema vascolare. Alcuni esempi di questi cambiamenti sono:
- l’aumento del numero e del diametro dei vasi sanguigni
- la perdita della loro struttura vascolare, con vasi orientati parallelamente e orizzontalmente.
Le cellule del basalioma mostrano spesso una forte riflettanza dovuta principalmente a numerosi fasci di fibre di collagene presenti su di esse. È spesso riconoscibile la presenza di cellule basaloidi sottili con nuclei scuri grandi e allungati.
La microscopia confocale consente la diagnosi sia “in vivo” che “ex vivo”, fornendo al contempo la possibilità di monitoraggio a lungo termine delle lesioni sospette.
Microscopia confocale “ex vivo”
Si tratta di un’innovativa applicazione della tecnologia del microscopio confocale, che sfrutta questa volta la presenza di due laser a diversa lunghezza d’onda.
Per "ex vivo" si intende la possibilità di eseguire un'analisi immediata del tessuto asportato, utilizzando la tecnologia del microscopio confocale direttamente in sala operatoria.
Questa tecnologia permette di fare una diagnosi immediata e di verificare la pulizia dei margini operatori durante l'intervento.
Tutto questo è possibile in soli 5 minuti, al contrario dei lunghi tempi necessari durante la chirurgia di Mohs. Quest’ultima si affida alla tradizionale preparazione e colorazione dei pezzi prelevati da studiare col microscopio tradizionale, e prevede 35-40 minuti circa per ogni sezione analizzata.
È possibile valutare i margini chirurgici del tessuto asportato, fondamentale per ottenere la radicalità, con alta specificità e sensibilità.
A seconda dei vari studi disponibili in letteratura, la specificità e sensibilità è del:
- 95/96% per i carcinomi spinocellulari
- 96/89% per i carcinomi basocellulari.
Questi dati sono quindi paragonabili a quelli ottenuti con la tradizionale analisi al microscopio delle sezioni di tessuto congelato. Questo rende perciò la microscopia confocale ex vivo una metodica estremamente affidabile.
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